SENYAWA ALKALOID DARI DAUN SIDAGURI (Sida rhombifolia L.)

Salah satu senyawa metabolit sekunder adalah senyawa alkaloid dengan berbagai keanekaragaman struktur, penyebarannya dialam serta mempunyai aktivitas biologisnya yang sangat penting. Alkaloid adalah senyawa siklik yang mengandung atom nitrogen yang penyebarannya terbatas pada orgnisme hidup. Efek fisiologis yang kuat dan selektifitas senyawa alkaloid menyebabkan senyawa alkaloid tersebut sangat bermanfaat dalam hal pengobatan (Marek,2007).

METODE PENELITIAN

Peralatan yang digunakan terdiri atas berbagai peralatan gelas laboratorium, alat destilasi, bejana maserasi, kolom kromatografi, corong pisah, neraca analitik, spektroskopi FT-IR, spektroskopi 1H-NMR.

Bahan dasar yang digunakan adalah daun sidaguri (Sida rhombifolia L). Bahan kimia yang digunakan adalah metanol, etilasetat, n-heksana, dietileter, kloroform, HCl 2 M, NH4OH pekat, reagent Mayer, reagent Wagner, reagent dragendorf, silika gel Merck GF254 untuk kromatografi lapis tipis, silika gel 60 (70-230 mesh, E.Merck) untuk kromatografi kolom.

Prosedur Penelitian

a. Uji Skrining Fitokimia

Untuk mengetahui adanya senyawa alkaloid yang terdapat dalam daun sidaguri (Sida rhombifolia L.), maka dilakukan uji pendahuluan penapisan golongan kimia ekstrak daun tersebut (Soetarno dan Soediro, 1997; Depkes RI, 2000) yaitu :

Uji Alkaloid

- Dengan plat KLT, dimana pada plat ditotolkan ekstrak, lalu disemprotkan dengan reagen Dragendrof. Apabila ada noda yang naik dan memberikan perubahan warna menjadi orange atau merah, diduga positif alkaloid.

- Dengan metoda ”Culvenor Fitzgerald”, daun segar sebanyak 4 gram dirajang halus, dibasahi dengan sedikit alkohol, kemudian ditambahkan sedikit pasir lalu digerus. Ditambahkan 10 ml kloroform amoniak 0,05 N, digerus lagi. Disaring dengan kapas, lalu diambil dengan pipet dan dimasukkan kedalam tabung reaksi besar, ditambahkan 5 ml asam sulfat 2 N lalu dikocok. Lapisan asam diambil dan dimasukkan kedalam tabung reaksi lalu ditambahkan satu tetes reagen Mayer. Apabila terbentuk endapan putih berarti positif alkaloid.

b. Ekstraksi dan Fraksinasi

Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi dimana serbuk daun sidaguri (Sida rhombifolia L.) sebanyak 1 kg dimaserasi dengan metanol (3 x 5L) pada temperatur kamar dan disaring lalu pelarut diuapkan dari ekstrak metanol dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak pekat metanol. Terhadap ekstrak metanol ini dilakukan partisi cair-cair dengan n-heksana. Masing-masing ekstrak dipekatkan kembali dengan rotary evaporator sehingga diperoleh residu kering dan dilanjutkan dengan uji skrining fitokimia. Ekstrak metanol ditambahkan HCl 2M hingga mencapai pH 2 dan didiamkan selama 24 jam, kemudian dicuci dengan dietileter. Selanjutnya ditambahkan NH4OH pekat sampai pH 9-10, diekstraksi dengan dietileter dan ekstrak dietileter tersebut diuapkan pelarutnya sehingga diperoleh ekstrak pekat dietileter.

c. Pemisahan dan Pemurnian

Dari hasil skrining fitokimia dengan menggunakan reagent Mayer dan reagent Dragendorf terhadap ekstrak dietileter daun sidaguri (Sida rhombifolia L.) menunjukkan bahwa daun tumbuhan tersebut mengandung senyawa alkaloid. Ekstrak pekat dietileter yang mengandung senyawa alkaloid kemudian dipisahkan dengan menggunakan kromatografi kolom. Sebelum dilakukan kromatografi kolom, terlebih dahulu terhadap fraksi dietileter tersebut dilakukan uji Kromatografi Lapisan Tipis (KLT) analitik untuk menentukan jenis eluen yang memiliki pola pemisahan paling baik yang akan digunakan pada kromatografi kolom. Komposisi pelarut ditentukan berdasarkan pendekatan KLT. Isolasi senyawa alkaloid dari daun sidaguri dilakukan dengan metoda kromatografi kolom menggunakan silika gel 60 sebagai fasa diam dan kloroform : metanol sebagai fasa gerak berdasarkan teknik “step gradient polarity” (SGP). Eluen yang digunakan adalah kloroform : metanol dengan nilai perbandingan sebagai berikut (90:10; 80:20; 70:30;60:40; 40:60). Eluen ditampung dalam botol vial 5 ml dan dianalisis dengan KLT. Fraksi-fraksi yang memiliki spot dengan nilai Rf yang sama digabung dan pelarutnya diuapkan, selanjutnya dilakukan pemurnian.

d. Karakterisasi Senyawa Hasil Isolasi

Terhadap senyawa hasil isolasi yang telah murni dilakukan analisis dengan menggunakan spektrofotometer FT-IR dan 1H-NMR. 

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil maserasi 1 kg serbuk daun sidaguri(Sida rhombifolia L.) dengan pelarut metanol didapatkan ekstrak kasar etanol sebanyak 120 gram, berbentuk cairan kental. Ekstrak metanol ini dipartisi dengan campuran pelarut n-heksana dan air dengan perbandingan n-heksana:air (1:1). Hal ini dilakukan untuk memisahkan senyawa-senyawa polar dan senyawa non polar. Masing-masing ekstrak dipekatkan dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak pekat metanol sebanyak 73 gram setelah diekstraksi dengan dietileter maka diperoleh ekstrak pekat dietileter sebanyak 45 gram. Berdasarkan uji KLT terhadap ekstrak dietileter maka didapatkan pola pemisahan yang paling baik adalah kloroform : metanol dengan perbandingan (7:3). Tujuan dari mendapatkan identitas noda dengan harga Rf pada uji KLT adalah untuk mencari pelarut yang akan digunakan pada kromatografi kolom (Markham, 1988)

Isolasi senyawa alkaloid dari daun sidaguri dilakukan dengan metoda kromatografi kolom menggunakan silika gel 60 sebagai fasa diam dan kloroform : metanol sebagai fasa gerak berdasarkan teknik “step gradient polarity” (SGP) agar senyawa-senyawa terpisah berdasarkan derajat kepolarannya. Hasil kromatografi kolom diperoleh sebanyak 117 fraksi, kemudian dilakukan penggabungan fraksi-fraksi berdasarkan uji KLT dengan melihat nilai Rf. Fraksi-fraksi yang memiliki spot dengan nilai Rf yang sama digabung sehingga didapat 5 fraksi dan pelarutnya diuapkan. Dari kelima fraksi tersebut dilakukan skrining fitokimia dan fraksi 2 dan 4 menunjukkan hasil positif mengandung senyawa alkaloid.

 Dalam penelitian ini hanya fraksi 2 yang dilakukan analisis lebih lanjut. Terhadap fraksi 2 tersebut dilakukan pemurnian dan diperoleh padatan berwarna kecoklatan sebanyak 59 mg. Berdasarkan hasil uji kelarutan senyawa ini memiliki kelarutan yang besar dalam kloroform dan dari hasil KLT dengan menggunakan penampak noda reagent dragendorf diperoleh noda tunggal. Analisis spektrum FT-IR senyawa hasil isolasi (Gambar 1)  menunjukkan adanya vibrasi ulur N-H pada bilangan gelombang 3395,10 cm^-1 dengan pita serapan yang tajam dan vibrasi regang N-H pada 1508,27 cm -1. Hal ini didukung oleh spektrum 1H-NMR (Gambar 2) yang menunjukkan adanya satu puncak melebar pada pergeseran kimia δ 6,47-6,50 ppm yang diduga merupakan gugus NH pada inti piperidin (Sastrohamidjojo, 1994).

 

Pergeseran kimia pada daerah δ 6,80-7,01 ppm, δ 7,40-7,49 ppm menunjukkan adanya proton dari cincin aromatis yang terikat pada cincin heterosiklik (Chamberlain, 1974) yang didukung oleh pita serapan spektrum IR pada bilangan gelombang 1628,21 dan 1491,27 cm-1 yang merupakan vibrasi C=C aromatik dan pada pergeseran kimia δ 3,88ppm terdapat puncak singlet yang diduga dari proton gugus O-CH3 yang posisinya pada senyawa alkaloid hasil isolasi belum dapat dipastikan (Jacobs, 1974)

Pergeseran kimia pada daerah δ 1,25ppm terdapat puncak singlet dengan intensitas yang tinggi dari proton CH3 yang belum dapat dipastikan jumlahnya. Dan pergeeran kimia pada daerah 1,38-2,35 ppm terdapat puncak multiplet dari proton CH dan CH2 yang kemungkinan menunjukk adanya proton CH dan CH2 yang membentuk cincin alifatis dari piperidin. Hal ini didukung oleh pita serapan pada dari spektrum IR pada bilangan gelombang 2933,19 cm-1 yang menunjukkan adanya vibrasi ulur C-H dan pada bilangan gelombang 1448,25 dan 1424,24 cm-1 yang menunjukkan adanya vibrasi regang CH2 dan CH3. Berdasarkan data-data spektrum FT-IR dan spektrum 1H-NMR khususnya dengan adanya serapan gugus NH yang merupakan ciri dari senyawa alkaloid maka diduga bahwa daun sidaguri (Sida rhombifolia L.) mengandung senyawa metabolit sekunder yaitu senyawa alkaloid.

PERMASALAHAN

dalam artikel diatas disebutkan bahwa gugus O-CH3 yang posisinya pada senyawa alkaloid hasil isolasi belum dapat dipastikan dan pergeseran kimia pada daerah δ 1,25ppm terdapat puncak singlet dengan intensitas yang tinggi dari proton CH3 yang belum dapat dipastikan jumlahnya. padahal telah dilakukan  analisis dengan menggunakan spektrofotometer FT-IR dan 1H-NMR.  dengan demikian struktur alkaloid tersebut tidak dapat ditentukan.

mengapa demikian? dengan hasil spektoskopi yang telah didapat diatas, dapatkah bibuat strukturnya atau ditentukan  posisinya??